Nan pwosesis pou fè etid jenetik, nou souvan rankontre echantiyon RNA ensifizan, pou egzanp, pou etidye ti timè anatomik oral, menm echantiyon yon sèl selil, ak echantiyon nan mitasyon jèn espesifik ki transkri nan nivo ki ba anpil nan selil imen.Natirèlman, pou tès COVID-19 la, si prelèvman yo pa nan bon plas oswa si pa ase fwa pandan echantiyon an, gwosè echantiyon an pral trè ba, se poutèt sa Komisyon Sante ak Planifikasyon Familyal te soti de jou de sa e te pase tès la, epi si echantiyon asid nikleyik la pa t 'pran sis echantiyon, ou ka rapòte li.
Sansiblite reyaktif la enpòtan paske nou gen pwoblèm sa a oswa pwoblèm sa a, kidonk kisa nou ka fè pou amelyore sansiblite RT-PCR?
Anvan nou diskite sou solisyon posib, ann mansyone de gwo konplikasyon ak sitiyasyon nou sot mansyone a.
Premye a tout, nou enkyete sou pèt RNA lè nou gen sèlman kèk popilasyon selil nan echantiyon nou an.Si yo itilize metòd separasyon ak netwayaj tradisyonèl yo, tankou metòd kolòn oswa metòd presipitasyon asid nikleyik, gen yon gwo posiblite pou kèk echantiyon yo pral pèdi.Yon solisyon se ajoute yon molekil transpòtè, tankou tRNA, men menm lè sa a, pa gen okenn garanti ke eksperyans rekiperasyon nou an se OK.
Se konsa, sa ki pi bon fason?Yon bon opsyon pou selil kiltive oswa echantiyon mikroanatomik se sèvi ak liz dirèk.
Lide a se divize selil yo pou 5 minit, lage RNA a nan solisyon an, Lè sa a, sispann reyaksyon an pou 2 minit, Lè sa a, ajoute lysate la dirèkteman nan reyaksyon an transcription ranvèse pou ke pa gen okenn RNA pèdi, epi finalman mete cDNA ki kapab lakòz dirèkteman. nan reyaksyon an tan reyèl.
Men, e si, akòz yon pwen depa limite oswa yon ti kantite ekspresyon jèn sib, nou ka resikle tout RNA a epi toujou pa bay ase modèl yo ka resevwa yon bon siyal an tan reyèl?
Nan ka sa a, etap pre-anplifikasyon an ka trè itil.
Sa ki anba la a se yon konplo pou ogmante sansiblite apre transcription ranvèse.Anvan yo kòmanse, nou bezwen mande en ki sib nou enterese, konsa tankou konsepsyon primè espesifik pou sib sa yo pou pre-anplifikasyon.
Sa a ka reyalize lè w kreye yon Jadendanfan melanje ak jiska 100 pè Jadendanfan ak yon sik reyaksyon 10 a 14 fwa.Se poutèt sa, yon Mix Master ki fèt espesyalman pou egzijans sa a nesesè pou pre-anplifye cDNA yo jwenn.
Rezon ki fè yo fikse kantite sik ant 10 ak 14 se ke kantite limite sa a nan sik asire owaza ant sib yo divès kalite, ki enpòtan anpil pou chèchè ki bezwen enfòmasyon molekilè quantitative.
Apre pre-anplifikasyon, nou ka jwenn yon gwo kantite cDNA, pou sansiblite deteksyon nan back-end la amelyore anpil, e nou ka menm delye echantiyon an epi fè plizyè reyaksyon PCR an tan reyèl pou elimine erè posib o aza.
Lè poste: Apr-11-2023